cromatografia líquida de alta performance, ou por HPLC, é uma técnica utilizada para separar os compostos a partir de uma solução mista. Um tubo de metal cheia com esferas de sílica, chamado de uma coluna de HPLC, é usado para separar a solução antes de ser detectado pelo detector de HPLC. Um pico duplo do detector lendo normalmente implica que alguma coisa está contaminando o sistema. Na maioria das vezes, o problema situa-se na coluna de HPLC.
Determinar qual o tipo de solvente está a ser injectado no sistema de HPLC. Se o solvente for mais forte do que a fase móvel líquida que passa no entanto, pode ocorrer de divisão de pico. Uma solução rápida é a utilização do mesmo solvente na fase móvel como o solvente na amostra. Se o problema persistir, a coluna de HPLC pode ser contaminado.
Lavar a coluna por bombagem de 100 por cento de metanol ou acetonitrilo, embora o sistema de HPLC, durante pelo menos 15 minutos. Isto irá remover materiais fortemente ligados ligadas à coluna. Inverta a coluna e efectuar o mesmo procedimento com o mesmo solvente. Este processo irá remover qualquer matéria particulada que podem ser entupimento do filtro poroso, de um filtro localizado na parte da frente da coluna. Se a cromatografia continua a apresentar picos duplos, a coluna foi contaminada com contaminantes fortes.
Com a coluna na direcção inversa, a bomba de 25 ml de água a 1 mL por minuto. Em seguida, lavar a coluna com 25 mL de isopropanol, cloreto de metileno e hexano sucessivamente. Voltar a ligar a coluna no sentido apropriado e lavar a coluna com 25 mL de solvente da fase móvel. Se o pico duplo continua a persistir, substitua a coluna.
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