Como calcular os títulos de vírus

Calçar luvas, encher 10 tubos de cultura com 9 ml de caldo e classificá-los "10 ^ -1," "10 ^ 2", "10 ^ -3", e assim por diante, até "10 ^ -10." Estes tubos serão utilizados para diluições em série virais. Desde vírus pode crescer para incrivelmente altas concentrações, é preciso diluí-los, a fim de contá-los de forma eficaz. Cada tubo representa uma diluição de dez vezes do vírus.

Tome 1 ml da cultura de vírus que deseja titule e transferi-lo para o tubo intitulado "10 ^ -1" com uma pipeta. Misturar bem no tubo. Esta é a sua primeira diluição dez vezes.

Tomar 1 ml da cultura mista a partir do seu tubo rotulado "10 ^ -1" e transferi-lo com um novo pipeta para o tubo seguinte, identificada como "10 ^ -2." Misturar este tubo bem.

Continue esse padrão para criar uma série de diluição em série. Irá acabar com tubos 9 de 9 ml e um tubo de 10 ml. As cargas virais nos seus tubos vai ser diluída em qualquer lugar a partir de 10 vezes o seu primeiro tubo () ou 100 vezes (o segundo tubo) para dez mil milhões de vezes (o tubo final).

Tomar 10 tubos de agar mole de triptona e 10 placas de Petri e classificá-los para se corresponder com os seus tubos de diluição em série.

Solte as tampas de modo que eles não saltam no calor e em seguida, coloque seus tubos de ágar num copo de água fervente. Isso vai derreter o agar de modo que você pode derramá-la em placas de Petri.

Transfira os seus tubos de um conjunto banho de água quente com um mínimo de 45 graus Celsius. Isso irá garantir que o seu agar não solidificar nos tubos antes de você ter a chance de derramá-la em uma placa de Petri.

Adicionar duas gotas de cultura bacteriana à sua agar e misture delicadamente. Estas são as bactérias que serão mortos, o que lhe permite contar o número de partículas de vírus em uma solução particular.

Adicionar 1 ml de cada diluição em série para o seu tubo de agar correspondente, enquanto os tubos estão ainda no banho de água quente. Por exemplo, 1 ml da sua diluição ^ -1 de série 10 deverá ir para dentro do tubo de agar marcado "10 ^ -1."

Misture cada tubo e, em seguida, verter cada tubo para dentro da placa de Petri, com o rótulo correspondente. Isto vai criar uma camada fina de agar que foi inoculado com as bactérias e os vírus em cada placa. Deixe as placas crescer durante a noite numa incubadora.

Tire suas placas fora da incubadora e examiná-los. Você deverá ver áreas nubladas ao longo da placa onde as bactérias cresceram, exceto para pequenas manchas claras chamadas placas. Estas placas são manchas de bactérias mortas, e cada placa representa um vírus.

Encontrar uma placa que tem entre 30 e 300 placas e contar o número exato de placas em que prato.

Tome o número de placas em no seu prato e multiplicar por 10. Se você contados 157 placas, você obteria 1570.

Multiplique o número que você tem na etapa anterior pelo inverso do número em seu tubo de diluição. Por exemplo, se a placa que você selecionou foi a placa 10 ^ -5, você iria multiplicar 1570 por 10 ^ 5 para obter 157000000. Este número final é o seu título de vírus, e representa o número de vírus por mililitro de sua cultura original.