Como executar Sequencing PCR

Os investigadores utilizar a sequenciação de PCR para estudar pequenas amostras de ADN. (Imagem: Comstock / Comstock / Getty Images)

Nos primeiros dias de análise de DNA, foi vital para pesquisadores e investigadores da cena do crime ter grandes amostras de DNA para que eles tenham alguma chance de chegar com resultados úteis. Que era antes da reacção em cadeia da polimerase (PCR), a sequenciação foi desenvolvido. sequenciação de PCR permitiu aos cientistas para amplificar regiões do genoma para análise. Graças a sequenciação de PCR, um investigador forense pode identificar um ser humano com apenas um décimo de um milionésimos de um litro - um microlitro 0,1 - da sua saliva.

Aqueça o DNA desconhecido para que seus fios emparelhados separar e as cadeias simples pode combinar com primers de DNA.

Mistura-se o molde de ADN com cloreto de magnésio, nucleidos de ADN e uma grande quantidade de iniciadores de ADN. O maior número de iniciadores assegura as cadeias de ADN não identificados combinar com os iniciadores e não com um outro. Arrefece-se a mistura de reacção fios individuais de modo combinam-se com os fios de iniciadores.

Vídeo: Chromatin Immunoprecipitation Visual Protocol

Adicionar polimerase de ADN. a polimerase de ADN é uma enzima que pode ler cadeias de ADN e estendê-los enganchando nucleótidos em conjunto, o que cria as cópias da primeira amostra de ADN não identificado.

Adicionar mais iniciadores de ADN e nucleótidos e repetir o ciclo. Repita até que você tenha DNA suficiente.

dicas avisos

A quantidade de molde de ADN que necessita para sequenciar uma PCR depende do tamanho do fragmento de PCR. Por exemplo, um molde de 200 a 500 pares de bases requer 25 a 100 nanogramas de material de ADN.
Antes de executar uma seqüência de PCR, você deve confirmar que há material de DNA em sua amostra usando um teste de brometo de etídio placa. Este método irá mostrar todos, mas as menores amostras.
Para visualizar a sequenciação por PCR, colocar o produto final em um aparelho de electroforese de gel.

Vídeo: Western Blot (WB) Visual Protocol

Sempre que possível, manter as concentrações de DNA não identificado na sua amostra o mais alto possível. Isto irá aumentar a qualidade e confiabilidade de seus resultados de sequenciamento de PCR.

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