Os três passos de PCR

A PCR é um processo de amplificação. A fim de gerar muitos microgramas de um dado ácido nucleico, você deve, naturalmente, ter o DNA de interesse, chamado de modelo. Ela pode vir de qualquer fonte - animais, plantas, vírus ou bactérias. (ARN pode ser analisada utilizando PCR, mas que tem de usar primeiro a enzima viral transcriptase inversa para gerar uma cia de ADN do RNA- seguida, pode utilizar essa cópia de ADN como molde.) Para a PCR, é necessário ter um calor forma de resistência a enzima polimerase de ADN, geralmente de Taq polimerase, o que faz com que novas cadeias de DNA. Você também precisa de seções curtas primers- de DNA que se ligam a pontos específicos do modelo e tocar a replicação dessa porção do modelo. Finalmente, é necessário dNTPs, os nucleótidos utilizados para construir os novos fios, e uma solução de soro fisiológico específico, chamado um tampão, em que a executar a PCR. Isto ajuda a estabilizar os reagentes e produtos da reacção.

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O primeiro passo na PCR é desnaturar o molde de ADN, o que significa descompactação as duas cadeias que, ligadas entre si, formam a estrutura em dupla hélice do ADN. No caso de PCR, o molde é brevemente aquecida para entre 92 ° a 95 ° C, suficientemente quente para quebrar as ligações de hidrogénio que mantêm na sua forma de DNA de dupla-hélice característica e separá-lo em duas cadeias simples.

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Após desnaturação é completa, a mistura é arrefecida a uma temperatura tão baixa quanto 45 ° C. Isto permite ligações de hidrogénio para formar pares de bases entre nucleótidos complementares do molde de ADN e os iniciadores de ADN, com adenina ligação a timina e citosina para guanina. A temperatura de recozimento é determinado com base no que se conhece sobre o molde de ADN e a sequência de iniciador. Por exemplo, se a amplificação de um gene a partir de um mosquito, se dispõe de iniciadores a partir de uma espécie de mosquitos do mesmo género, pode ter um com temperatura de recozimento mais elevada se a única sequência disponível é a partir de uma mosca da fruta, a temperatura de recozimento terá que ser mais baixos, porque as seqüências irá corresponder a menos perfeitamente. Emparelhamento ocorre rapidamente e eficientemente, porque não é muito mais ADN iniciador de ADN molde na mistura, especialmente no início.

Uma vez que o recozimento tiver ocorrido, uma forma estável ao calor de polimerase de ADN de passos para começar a adição rápida, sequencial dos nucleótidos para as cadeias de iniciador - 50 a 100 nucleótidos por segundo. Para lançar este na engrenagem, a mistura é aquecida de novo, desta vez para uma mais modesto 72 ° C.

A PCR é um processo exponencial. Isto significa que, depois de um ciclo, o dobro da quantidade original de ADN matriz, exists- após dois ciclos, quatro vezes o valor original exists- após três ciclos, oito vezes, e assim por diante.