Diferença entre direto e indireto ELISA

No teste ELISA directo, um anticorpo primário é realizada nas paredes de uma placa de microtitulação. Quando a amostra suspeita de conter o antigénio é adicionado, existe uma reacção antigénio-anticorpo. Em seguida, um anticorpo secundário ligado a enzima que é capaz de reagir com o antigénio é adicionado. Se o antigénio estiver presente na amostra, liga-se a este anticorpo ligado a enzima. Quando um substrato incolor é adicionado, se desenvolve uma cor, isto indica a presença do antigénio. No ensaio ELISA indirecto, o antigénio é mantida sobre as paredes da placa de microtitulação. Quando uma amostra suspeita de conter anticorpos é adicionado, de uma reacção antigénio-anticorpo ocorre. Em seguida, é adicionado um anticorpo secundário ligado a enzima capaz de reagir com a região não ligada do anticorpo. Quando o substrato é adicionado incolor, que leva ao desenvolvimento da cor se a amostra contém anticorpos utilizados.

Uma ampla gama de anticorpos secundários marcados encontram-se comercialmente disponíveis. Além disso, é possível criar vários anticorpos primários em uma dada espécie e usar o mesmo anticorpo secundário de detecção. Isso faz com que o ELISA indireto fácil de executar. No ELISA directo, os anticorpos primários têm de ser especificamente preparado para reagir com o antigénio específico suspeita de estar presente na amostra. Isso faz com que o ELISA direta desvantajosa em comparação com o teste indireto.

O teste ELISA directo é rápida em comparação com o ensaio indirecto porque utiliza apenas um único anticorpo. O ensaio ELISA indirecto exige um passo adicional de incubao com um segundo anticorpo durante o procedimento de teste, o que provoca um atraso na obtenção de resultados.

O teste ELISA directo é menos sensível do que a forma indirecta do teste, porque há muito menos amplificação de sinal. Além disso, a marcação do anticorpo primário com uma enzima que prejudiquem o seu perfil immonoreactivity. No caso do ensaio ELISA indirecto, o anticorpo primário não está marcado e, por conseguinte, que mantém a sua imunorreactividade. Além disso, cada anticorpo primário tem muitos epitopos que se podem ligar com o anticorpo secundário isto permite a amplificação do sinal, melhorar a sensibilidade do método. No entanto, há uma possibilidade de reactividade cruzada entre o antigénio e o anticorpo secundário, o que leva a um erro nos resultados. Não existe tal possibilidade no método ELISA direto.