O papel de GTE no DNA Extraction

GTE é usada para ressuspender peletes de células bacterianas antes da lise (quebra aberto), as células e recolhendo o DNA de plasmídeo para dentro. Lisozima, que suaviza as membranas das células, é frequentemente adicionado ao longo com o tampão de GTE. Conseguir uma suspensão homogénea de células inteiras durante este passo para que a solução de lise posteriormente adicionado pode chegar a todas as células é a chave para obter bons rendimentos de DNA. GTE é projetado para fazer isso ao mesmo tempo proporcionar um ambiente estável para o DNA.

50 mM (milimolar) de açúcar glucose é adicionada ao tampão de GTE para manter a osmolaridade em que a concentração de soluto fora das células está próximo de que no interior das células. Isso impede que a lise celular prematura, o que pode provocar rendimentos mais baixos de ADN para devido à agregação e degradação. Os outros componentes do tampão também contribuem para a osmolaridade da solução, mas a glucose, sendo um não electrólito, é uma boa escolha, pois que não interfira com as propriedades de amortecimento da solução.

Tris é o nome curto para tris (hidroximetil) aminometano, que é um tampão de pH muito comum. No caso de tampão GTE, o sal do ácido (Tris-HCl) é adicionado ao tampão numa concentração de 25 mM. Isto mantém o pH da solução a uma média de 8,0 quase fisiológica, um pH ideal para a prevenção da hidrólise ácida (degradação) do DNA de plasmídeo e as reacções secundárias indesejadas dos outros componentes celulares.

EDTA, ou o ácido etilenodiaminotetracético, ou capta "quelatos" iões metálicos a partir da solução, impedindo-os de participar em reaces secundias indesejadas. Em tampão de GTE, é adicionado EDTA a 10 mM. A sua principal finalidade é no tampão para arredondar-se zinco livre, de magnésio e de cálcio, impedindo assim a degradação de ADN por certas vias que requerem esses metais.

Mantenha o seu tampão GTE frio e torná-lo em pequenas quantidades para evitar o crescimento de bactérias indesejadas na mesma. Açúcar e o pH controlado para fazer um meio de crescimento excelente. Sempre usar água purificada. A água da torneira pode ter um excesso de iões de metal a partir dos tubos, o que pode sobrecarregar a capacidade de EDTA para capturar. Se você suspeitar da presença de RNA de interferência em sua amostra, adicione RNase à 100 microgramas por mililitro de seu buffer GTE para eliminar o problema.