Os cientistas usam o protocolo de maxiprep de plasmídeo quando necessário extrair grandes quantidades de DNA de plasmídeo a partir de uma cultura de células. De facto, a única diferença principal entre os protocolos de miniprep, Midiprep e Maxiprep é a quantidade de cultura de culas utilizado e, assim, o plasmídeo de ADN total produziu. Com base na Maxiprep Protocolo Promega, existem três passos essenciais.
Transformado, ou o plasmídeo contendo, bactérias de E. coli são cultivadas numa placa de agar e usadas para inocular 100 a 200 mL de meio de Luria-Bertani (LB). A cultura é então colocada numa placa de agitação em uma incubadora a 37 graus Celsius grau e deixou-se crescer durante 12 a 21 horas. volume celular óptima é alcançada em 12 a 16 horas.
A cultura bacteriana é sedimentadas utilizando uma centrífuga e o sobrenadante ou caldo de carne pode ser retirado. Uma solução de hidróxido de sódio e sulfato de dodecilo de sódio (SDS) é adicionado ao sedimento para induzir lise celular. Devido ao grande volume de células, deve ser tomado cuidado para assegurar que o sedimento celular resuspends completamente em solução. Caso contrário, nem todas as células serão lisadas e o rendimento potencial ADN de plasmídeo é gravemente afectados.
A extracção de ADN plasmídeo utiliza uma solução alcalina, neste caso, hidróxido de sódio, para desnaturar o ADN de ADN genómico e plasmídico (bacteriana). Quando a solução é levada de volta para um pH neutro, o DNA de plasmídeo a ser muito menor do que o ADN genómico é capaz de re-emparelhamento. O ADN genómico precipita a partir da solução durante a centrifugação ou extracção coluna vácuo deixando DNA de plasmídeo relativamente puro na suspensão ou ligado à coluna.
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