Fontes de erro em eletroforese em gel

A electroforese em gel envolve a utilização de um gel geralmente feito de polímeros, tais como agarose. O gel é imerso numa solução tampão que conduz a um campo eléctrico. A amostra de ADN de interesse é primeiro fragmentados utilizando enzimas de restrição e é então injectado no gel. Quando o campo eléctrico é ligado, os fragmentos de ADN no gel de migrar em direcção ao eléctrodo positivo. Se os fragmentos de ADN são de tamanhos diferentes, então os tempos de migração será diferente para cada fragmento de tamanho. Os fragmentos são então visualizadas utilizando um corante ou autorradiografia e são visíveis como bandas no gel.

A principal aplicação da electroforese é como uma ferramenta para a análise de ADN em biologia molecular, mas também é usado em medicina forense, como um meio de identificar amostras a partir de uma cena de crime. É importante que as fontes de erros na esta técnica ser minimizado de forma a obter resultados precisos. Uma fonte de erro é a contaminação da amostra de ADN. Se houver DNA estranho na amostra, o gel irá ter mais do que bandas iria ser encontrado em um gel que contém apenas a amostra purificada.

A concentração do gel também tem de estar correcto para evitar erros. Se a concentração for demasiado elevada ou demasiado baixa, os fragmentos irão migrar ou muito lentamente ou muito rapidamente. Isso vai levar a erros na resolução dos diferentes bandas. Durante a eletroforese prazo, deve ser tomado cuidado para assegurar que a tensão é constante. Quaisquer flutuações na tensão resultará em migração instável de fragmentos de ADN, conduzindo a erros na leitura das bandas. A solução tampão deve também ser de composição correcta, tal como um tampão com o pH errado ou concentração iónica vai mudar a forma de fragmentos de ADN, alterando também os seus tempos de migração.

Mais importante, o gel deve ser visualizado corretamente. Se a concentração do corante ou sonda radioactiva utilizada para visualizar as amostras é demasiado elevada, a imagem resultante será muito sujo, como fragmentos residuais também vai ser visualizado. Se a concentração do gel é demasiado baixa, não haverá visualização. Quando os processos adequados foram seguidos durante todas as fases, electroforese em gel irá produzir resultados que são precisas e podem ser utilizados com grande confiança. Tal como acontece com todos os procedimentos científicos, electroforese em gel pode ser propenso a erros, mas estes podem ser minimizados com a preparação e manipulação apropriada.