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Como realizar uma HPLC

Realização de um teste de HPLC (cromatografia líquida de alta eficiência) é um conhecimento técnico que deve apenas ser levada a cabo por pessoal treinado. HPLC tem sido cada vez mais utilizados em laboratórios desde a década de 1980. É usada para pesquisa e em laboratórios de universidades e para separar e identificar moléculas ou compostos orgânicos complexos. O sistema pode ser executada em fase normal ou reversa.


A máquina de HPLC consiste de um reservatório, desgaseificador, injector, coluna ligado ao forno e detector, integrador e de software (ver Resource 1).

Coisas que você precisa

  • Programas
  • Computador
  • HPLC
  • balde de resíduos
  • Reagente (metanol / água)
  • pH (papel de litmus)
  • Eletricidade

correndo HPLC



  • Ligue a máquina HPLC seguindo as orientações do fabricante. Configurar a instrumentação (ver referência 1). Definir a HPLC correctamente é o aspecto principal deste teste e não é uma técnica padrão. Escolha do método correcto para as substâncias a serem analisadas por HPLC.

    Coloque a coluna da direita da maneira correta após a colocação seta mostrando. Definir o comprimento de onda a ser capaz de detectar os compostos complexos. Configure a temperatura adequada.



    Lava-se a coluna com metanol a 50% e água, durante 30 minutos. Permitir que a fase móvel para passar.

    Vídeo: Preparing Tris Buffer

    Configure a taxa de fluxo como indicado na metodologia.



  • A fase móvel de HPLC é crítica e resultados satisfatórios dependerá do facto da preparação foi efectuada correctamente (ver referência 2). Existem dois tipos de fase móvel utilizada em HPLC, eluição de gradiente ou isocrãtica. O gradiente de eluição é onde são necessárias duas fases móveis orgânicos, em momentos diferentes. Com eluição isocrática, uma única fase orgânica é necessário (metanol / água).

  • Certifique-se de que a máquina de HPLC e o computador está ligado através de um cabo RS232 para permitir que a informação a fluir entre as duas máquinas (ver referência 3).



  • Preparar a amostra de acordo com a especificação na metodologia. Escolha o método analítico específico desejado e registrado no computador.

    Escolha o HPLC certo quando há muitas máquinas de HPLC vinculados. Ir para instrumento e abrir a lista de amostras.

    Vídeo: Métodos Cromatográficos - Parte 1

    Abra uma janela e escrever o nome ea data do teste. Salve isso.

  • A lista de exemplos aparece em forma de gráfico. Complete os detalhes sobre o gráfico para a amostra que você preparou.

    Vídeo: O gênio do HPLC

    Coloque frascos de amostra corretamente na máquina de acordo com a metodologia. Prima start para iniciar a análise.

dicas avisos

  • Todos os passos da HPLC e a preparação da amostra deve ser correcta, a fim de evitar a repetição do teste. investigações repetir custar tempo e dinheiro.
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