Tipos de Colunas de HPLC

Vídeo: Cromatografia

Os experimentadores utilizar cromatografia de permuta iónica ao separar amostras ionizáveis, ou amostras que podem tornar-se carregadas. A fase estacionária, que é o material sólido que reveste a coluna e que interage com a amostra, possui uma carga oposta à da amostra de interesse, de modo a que a amostra será atraído para as paredes da coluna. Esta atração retarda o tempo de eluição, ou o tempo que leva para passar todo o caminho até a coluna na fase móvel, da amostra. Os mais carregadas as partículas da amostra são, o mais atraído eles serão à fase estacionária, resultando em um tempo de eluição mais lenta. Os tempos de eluição representam a intensidade da carga das partículas e, portanto, são os principais meios de classificação dos diferentes compostos dentro da amostra.

Vídeo: CROMATOGRAFIA GASOSA GC -- FID video

Como o seu nome indica, de adsorção Cromatografia funciona através de uma fase estacionária adsorvente. Adsorção, não deve ser confundida com a absorção, envolve a ligação temporária das partículas da amostra para a fase estacionária da coluna. O grau em que uma partícula pode adsorver amostra para a fase estacionária é determinada pela polaridade relativa, ou carga, que a partícula pode possuir em um determinado momento. Este varia de cromatografia de permuta iónica, em que as partículas não estão carregadas explicitamente, mas eles são ligeiramente positiva ou negativa, por vezes, como a rotação das partículas e vibra. À medida que a partícula se move para baixo na coluna, que adsorve e DE-adsorve em graus variados com base no nível de polaridade que possui. tempos de eluição fornecer uma medida de nível de polaridade das partículas da amostra.

Size-Exclusion Chromatography utiliza uma técnica de separação diferente do que a de Ion Exchange ou adsorção Cromatografia. Este tipo de coluna é menos comum do que as outras duas, mas é útil quando se separa grandes biomoléculas, como proteínas ou hidratos de carbono. A fase estacionária é constituído por partículas não carregadas, que são controladas pelo tamanho e poroso. Quando a amostra é disparado através da coluna, as partículas de tamanho menor são temporariamente absorvida para o revestimento da coluna, enquanto que as partículas maiores passam diretamente através e eluir em primeiro lugar. A fase estacionária é concebido de modo que quanto menor a partícula, o mais fundo no revestimento penetra coluna, o que significa que as partículas mais pequenas vai levar a maior quantidade de tempo de re-superfície e eluir. As amostras podem ser classificados de acordo com o tempo de eluição, o que corresponde directamente ao tamanho de partícula.