Quais são as desvantagens de HPLC?

cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é uma técnica de laboratório usado para separar e identificar compostos. Ele é um tipo de cromatografia em coluna que depende de diferentes polaridades dos compostos em uma solução, de modo a separá-los. HPLC difere de cromatografia em coluna padrão porque usa pressão para forçar a solução através da coluna mais rapidamente, e, portanto, produz mais rápido, e por vezes mais preciso, os resultados. O objectivo é separar os compostos na coluna e tê-los sair separadamente.

Por causa da velocidade de HPLC e a dependência de diferentes polaridades dos compostos, dois compostos com estrutura semelhante e polaridades pode sair do aparelho de cromatografia, ao mesmo tempo ou aproximadamente ao mesmo tempo. Isto é conhecido como co-eluição. Coeluição torna determinar precisamente a que porção da mistura eluída em que ponto difícil.

HPLC tipicamente utiliza uma coluna de vidro cheia com grânulos feitos de materiais diferentes. As misturas serem forçadas através da coluna ter produtos químicos que se ligam com diferentes dosagens para os grânulos. A força da ligação, o que depende da similaridade em polaridade, determina quanto tempo o produto químico vai ligar-se ao cordão antes de ser libertado. Alguns compostos ligam-se fortemente de modo que, essencialmente, nunca são libertados a partir das esferas na coluna e nunca são medidos na solução que sai da coluna.

técnicas de separação típicas envolvem o laboratório o desenvolvimento de um ensaio, ou método de separação e, em seguida aplicação que ensaio para separar os compostos individuais a partir de uma solução. No entanto, isto resulta geralmente em várias soluções que também têm de ser sujeitos procedimentos, levando a um aumento exponencial na complexidade. Embora HPLC muitas vezes pode simplificar e acelerar esse processo, o custo do desenvolvimento de um aparelho de HPLC pode tornar-se tremenda. O desenvolvimento de um aparelho de HPLC, embora muito mais eficiente, é muito mais caro do que o desenvolvimento de outros ensaios para a separação de compostos. Isso faz com que não financeiramente viável para muitos laboratórios pequenos de propriedade privada.

HPLC é utilizada não só para separar compostos simples, que também é utilizada para isolar as proteínas específicas a partir de uma mistura celular. Neste caso, as pérolas na coluna são geralmente revestidos com um anticorpo específico para a proteína é necessário recolher. As proteínas ligam-se a anticorpos e a restante solução é passada através da coluna, em seguida, as proteínas são libertadas utilizando outra solução e recolhido. Isso requer um técnico altamente qualificado para monitorar a coluna em todos os momentos e certifique-se de que o processo está sendo executado exatamente como planejado.